Stiahnite si knihu "Clinical Laboratory Research" (2,84 Mb). Stanovenie bielkovín (jednotná metóda Brandberg-Roberts-Stolnikov) Kvalitatívna vzorka Heller pri štúdiu moču

Nie si otrok!
Uzavretý vzdelávací kurz pre deti elity: "Skutočné usporiadanie sveta."
http://noslave.org

Z Wikipédie, voľnej encyklopédie

Gellerov test, pomenovaná po rakúskom patológ J.F.Heller, všeobecný názov pre kvalitatívnu reakciu na bielkovinu v moči. Test má citlivosť 0,033 g/l a používa sa pri klinickej diagnostike proteinúrie. Princíp detekcie proteínu je založený na jeho denaturácii pod vplyvom denaturačného faktora - koncentrovanej kyseliny dusičnej alebo Larionovho činidla.

Je potrebné poznamenať, že určité množstvo bielkovín je vždy prítomné v moči, ale spravidla je jeho koncentrácia v moči zdravého človeka pod prahom citlivosti kvalitatívnej reakcie a nie je detegovaná jednoduchými metódami. Pre množstvá bielkovín nad 0,033 g/l nie je vzorka vhodná. Pri vyšších koncentráciách zrieďte moč alebo použite Esbachov albuminometer.

Na stanovenie množstva celkových bielkovín v moči sa používa metóda založená na Gellerovom teste – metóda Brandberg-Roberts-Stolnikov (W. Roberts, 1830-1899, anglický terapeut). Technika zahŕňa riedenie moču na spodnú hranicu citlivosti vzorky (0,033 g/l) a dobu tvorby krúžku 2-3 minúty.

Priebeh analýzy

Činidlá: koncentrovaná (dymiaca) kyselina dusičná alebo Larionova činidlo. Testovaný moč by mal byť čistý a kyslý.

Príprava Larionovho činidla

Pripravíme si nasýtený roztok chloridu sodného (20-30 g soli rozpustíme v 100 ml teplej vody, necháme odstáť do vychladnutia). Supernatant sa vyhodí a prefiltruje. K 99 ml filtrátu pridajte 1 ml koncentrovanej kyseliny dusičnej (môžete nahradiť 2 ml kyseliny chlorovodíkovej).

Technika výskumu

Približne rovnaké množstvo moču sa opatrne navrství pozdĺž steny do skúmavky s 1-2 ml činidla. V prítomnosti bielkoviny sa asi po 2-3 minútach na rozhraní medzi kvapalinami pozoruje zákal – biely prstenec denaturovanej bielkoviny.

Pri použití kyseliny dusičnej sa môže vyskytnúť falošne pozitívny výsledok v dôsledku vysokej koncentrácie nukleoalbumínu alebo urátových solí. V prvom prípade zmizne, keď sa trubica mierne zatrasie, a v druhom prípade je krúžok umiestnený oveľa vyššie ako rozhranie medzi médiami a pri zahriatí zmizne; pri opakovaní testu so zriedeným močom sa krúžok nevytvorí. Niekedy sa tiež objaví hnedastý pigmentovaný kruh z oxidácie urochrómu kyselinou dusičnou.

Použitie činidla Larionic, na rozdiel od kyseliny dusičnej, má množstvo výhod: pigmentové krúžky sa nevytvárajú na hranici vrstvenia a pozitívny výsledok poskytuje jasnejšie proteínové krúžky.

pozri tiež

Napíšte recenziu na článok "Gellerov test"

Odkazy

Literatúra

[[C:Wikipedia:Články bez obrázkov (krajina: Chyba Lua: callParserFunction: funkcia "#property" sa nenašla. )]][[C:Wikipedia:Články bez obrázkov (krajina: Chyba Lua: callParserFunction: funkcia "#property" sa nenašla. )]]Chyba Lua: callParserFunction: funkcia "#property" sa nenašla. Gellerov test Chyba Lua: callParserFunction: funkcia "#property" sa nenašla. Gellerov test Chyba Lua: callParserFunction: funkcia "#property" sa nenašla. Gellerov test Chyba Lua: callParserFunction: funkcia "#property" sa nenašla. Gellerov test Chyba Lua: callParserFunction: funkcia "#property" sa nenašla. Gellerov test Chyba Lua: callParserFunction: funkcia "#property" sa nenašla. Gellerov test

Výňatok charakterizujúci Gellerov test

Bol som divoko zranený a smutný za nimi, za seba a za všetkých, ktorí bojovali a stále verili, že môžu niečo zmeniť... Ale mohli? .. Keby každý, kto bojoval, iba zomrel, ona Aký zmysel má takéto vojna?
Zrazu sa predo mnou objavil ďalší obrázok...
V tej istej malej kamennej cele, kde na podlahe stále ležalo krvavé telo Magdalény, kľačali okolo nej rytieri jej chrámu... Všetci boli nezvyčajne oblečení v bielo - snehobielych dlhých šatách. Stáli okolo Magdalény so sklonenými hrdými hlavami a po ich prísnych skamenených tvárach stekali v potokoch slzy... Prvý vstal mág, ktorého priateľom bol kedysi Ján. Opatrne, akoby sa bál, že si ublíži, namočil prsty do rany a krvavou rukou si na hruď nakreslil niečo, čo pripomínalo krvavý kríž... Druhý urobil to isté. A tak postupne vstali a s úctou si namáčali ruky do svätej krvi a na snehobiele rúcha si nakreslili červené kríže... Cítil som, ako mi začínajú vstávať vlasy. Bolo to ako nejaký strašidelný rituál, ktorému som stále nerozumel...
"Prečo to robia, Sever?" spýtal som sa potichu, akoby som sa bál, že ma budú počuť.
"Je to prísaha, Isidora." Prísaha večnej pomsty... Prisahali na krv Magdalény - pre nich najsvätejšiu krv -, že pomstia jej smrť. Odvtedy rytieri chrámu nosili biele plášte s červenými krížmi. Len takmer nikto z cudzincov nikdy nepoznal ich skutočný význam ... A z nejakého dôvodu všetci veľmi rýchlo „zabudli“, že rytieri chrámu sa pred smrťou Magdalény obliekali do jednoduchých tmavohnedých overalov, ktoré „nezdobili“ žiadne kríže. . Chrámoví rytieri, podobne ako Katari, nenávideli kríž v zmysle, v akom ho „uctieva“ kresťanská cirkev. Považovali ho za podlý a zlý nástroj vraždy, nástroj smrti. A to, čo si namaľovali na hrudi krvou Magdalény, malo úplne iný význam. Ide len o to, že kostol úplne „prekreslil“ význam chrámových rytierov tak, aby vyhovoval jeho potrebám, ako všetko ostatné súvisiace s Radomirom a Magdalénou ....
Tak isto po smrti verejne vyhlásila zosnulú Magdalénu za ženu z ulice...
- tiež poprel deti Kristove a jeho manželstvo s Magdalénou ...
- tiež ich oboch zničil "v mene viery Kristovej", s ktorou obaja celý život urputne bojovali...
- tiež zničili Katar, používajúc meno Krista... meno človeka, ktorého Viere a poznaniu učili...
- zničila aj templárov (Chrámových rytierov), vyhlásila ich za prisluhovačov diabla, ohovárala a oháňala blatom ich činy a vulgarizovala samotného Majstra, ktorý bol priamym potomkom Radomíra a Magdalény ...
Keď sa kresťanská cirkev zbavila všetkých, ktorí mohli nejakým spôsobom poukázať na podlosť a podlosť „najsvätejších“ diablov Ríma, vytvorila legendu, ktorú spoľahlivo potvrdili „nesporné dôkazy“, ktoré nikto z nejakého dôvodu nikdy neoveril, a nikoho ani nenapadlo zamyslieť sa nad tým, čo sa deje.

Stanovenie koncentrácie bielkovín v moči metódou riedenia.

R-you 50% roztok dusíka do-you alebo p-larion. Priebeh stanovenia: do statívu sa umiestni niekoľko skúmaviek a naleje sa 1 ml roztoku kyseliny dusičnej, pridá sa 1 ml moču, navrství sa na činidlo a zaznamená sa čas, keď sa objaví krúžok, zaznamenáme čas vzhľad prsteňa. Ak je krúžok široký, zrieďte moč.

4. Stanovenie koncentrácie bielkovín v moči s 3% kyselinou sulfosalicylovou.

Roztoky: 3% sc, chlorid sodný 9%, pp albumín 10% Priebeh stanovenia: 1,25 ml číreho moču sa umiestni do dvoch odmeraných centrifugačných skúmaviek "O" - skúsenosť a "K" - kontrola. K pokusnému roztoku sa pridá 3,75 ml 3% roztoku kyseliny sulfosalicylovej a ku kontrole 3,75 ml 0,9% roztoku chloridu sodného. Nechajte 5 minút pôsobiť a potom fotometricky na FEC pri vlnovej dĺžke 590 - 650 nm (filter oranžového alebo červeného svetla) v kyvete s hrúbkou vrstvy 5 mm experimentujte proti kontrole. Výpočet sa vykonáva podľa kalibračného grafu alebo tabuľky. Princíp metódy je založená na skutočnosti, že proteín s kyselinou sulfosalicylovou vytvára zákal, ktorého intenzita je priamo úmerná koncentrácii proteínu.

5. detekcia glukózy v moči, Gainesov-Akimovov test. Princíp: Glukóza pri zahrievaní v alkalickom prostredí redukuje hydroxid meďnatý (žltý) na monohydroxid meďnatý (oranžovo-červený). Príprava činidla: 1) 13,3 g chem. čistý kryštalický síran meďnatý (CuSO 4 . 5 H20) roztoku. v 400 ml vody. 2) 50 g lúhu sodného sa rozpustí v 400 ml vody. 3) 15 g čistého glycerínu sa zriedi v 200 ml vody. Zmiešajte prvý a druhý roztok a ihneď pridajte tretí. Stojany na činidlá. Pokrok v definícii: Do skúmavky sa pridá 1 kvapka moču a 9 kvapiek činidla a varí sa vo vodnom kúpeli 1-2 minúty. Pozitívny test: žltá alebo oranžová farba kvapaliny alebo zrazeniny.

6. Kvalitatívne stanovenie glukózy v moči glukózooxidázovou metódou. Princíp metódy: glukóza sa oxiduje za prítomnosti glukózoxidázy, podľa reakcie: Glukóza + O 2 s glykonolantom + H 2 O 2. Vzniknutý peroxid H pôsobením peroxidázy oxiduje substrát za vzniku farebného produktu.

Nalejte a inkubujte 15 minút pri 37 0 C. Pozrite sa na CPK, 5 mm kyvetu.

Potom sa vykonajú výpočty podľa vzorca: С op = Ext op . Cst/ Ect st.

7. Detekcia ketolátok v moči Lestrade testom. Na podložné sklíčko sa nanesie (na hrot skalpela) prášok alebo tableta roztoku Lestrade a nanesú sa naň 2-3 kvapky moču. V prítomnosti ketónových teliesok sa objaví ružová až fialová farba. Vzorka sa hodnotí na bielom pozadí.

8. Detekcia krvného farbiva v moči testom s 5% alkoholovým roztokom amidopyrínu.

1,5 % liehový roztok amidopyrínu (0,5 g amidopyrínu sa rozpustí v 10 ml 96 % liehu) 2,3 % roztok peroxidu vodíka 1,5 g hydropyritu sa rozpustí v 50 ml vody) -éterický extrakt alebo pretrepaný nefiltrovaný moč, pridať 8- 10 kvapiek 5% roztoku amidopyrínu a 8-10 kvapiek 3% roztoku peroxidu vodíka, výsledok berte do úvahy najneskôr do 2-3 minút Vzorka sa považuje za pozitívnu v prípade šedofialového sfarbenia.

Detekcia urobilínu v moči pomocou Neubauerovho testu.

Na základe farebnej reakcie urobilinogénu s Erlichovým činidlom, ktoré pozostáva z 2 g paradimetylaminobenaldehydu a 100 ml roztoku kyseliny chlorovodíkovej (200 g.l).1 ml moču a 1 ml roztoku.Výskyt červeného sfarbenia v prvých 30 sekundách indikuje zvýšenie obsahu urobilinogénu.Normálne sa farba objaví neskôr alebo úplne chýba.Po zastavení moču sa urobilinogén mení na urobilín a test môže byť falošne negatívny.Nedá sa zohrievať,pretože vedľajším produktom sú komplexné zlúčeniny aldehyd s porfyrínmi,indol a môžu vznikať drogy.

Detekcia bilirubínu v moči pomocou kolofónneho testu.

Alkoholový roztok jódu (10g.l): 1g kryštalického jódu sa rozpustí vo valci s objemom 100ml v 20-30ml 96g rektifikovaného liehu a potom sa doplní liehom po značku. Do chemickej skúmavky nalejte 4-5 ml testovaného moču a opatrne ho navrstvite alkoholovým roztokom jódu (ak má moč nízku relatívnu hustotu, potom ho navrstvite na alkoholový roztok jódu). antipyrin, ako aj ked je v moci krvne farbivo, test vyjde pozitivne).U zdraveho cloveka je tento test negativny.

Vyšetrenie moču suchou chémiou (monopolytesty).

Princíp. Metóda je založená na účinku proteínu na farbu indikátora v tlmivom roztoku, v dôsledku čoho farbivo mení farbu zo žltej na modrú.

Pri testovaní na prítomnosť bielkovín v moči a určovaní pH pomocou indikátorového papierika sa odporúča dodržiavať nasledujúce pokyny:

1. Zachyťte moč do dôkladne umytej misky.
2. Použite čerstvo odobratý moč bez konzervačných látok.
3. Po odstránení potrebného počtu indikačných pásikov z puzdra opatrne uzavrite.
4. Nechytajte indikačné zóny prstami.
5. Používajte len do dátumu exspirácie uvedeného na štítku.
6. Dodržujte pravidlá skladovania indikátorového papierika.
7. Vyhodnoťte výsledky v súlade s pokynmi dostupnými v pokynoch.

Vykonanie testu moču na chemickom analyzátore suchého moču.

Pokrok v definícii. Z puzdra sa vyberie prúžok indikátorového papierika a ponorí sa do testovaného moču tak, aby sa obe indikátorové zóny zvlhčili súčasne. Po 2-3 sekundách sa prúžok umiestni na bielu sklenenú dosku. Okamžite vykonajte hodnotenie pH pomocou farebnej stupnice vytlačenej na peračníku. Hodnota pH na farebnej škále zodpovedá 6,0 (alebo menej); 7,0; 8,0; 9,0.

Príprava moču príprava preparátov z močového sedimentu mikroskopickým vyšetrením približným spôsobom.

Mikroskopické vyšetrenie močového sedimentu sa vykonáva približnou metódou vo všeobecnej analýze a kvantitatívnom výpočte tvarovaných prvkov na presnejšie posúdenie stupňa leukocytúrie a hematúrie.

Pravidlá pre prípravu močového sedimentu na mikroskopiu.

Prvá ranná časť moču sa podrobí mikroskopickému vyšetreniu.

Po predbežnom premiešaní sa odoberie 10 ml moču, centrifuguje sa 10 minút pri 1500 ot./min.

Potom sa centrifugačná skúmavka s močom prudkým pohybom prevráti, supernatant sa rýchlo naleje do prázdnej nádoby.

Premiešame, kvapku nanesieme na podložné sklíčko a opatrne prikryjeme krycím sklíčkom.

Ak sa zrazenina skladá z niekoľkých vrstiev, potom pripravte prípravok a potom znova odstreďte a pripravte prípravky z každej vrstvy oddelene.

Pri absencii sedimentu viditeľného okom sa na podložné sklíčko a mikroskopicky nanesie kvapka moču.

Na začiatku sa materiál skúma pri malom zväčšení (okulár 7-10, objektív 8), pričom sa sklopí kondenzor, clona sa mierne zúži, potom sa preparácia podrobne študuje pri veľkom zväčšení (okulár 10,7; objektív 40) .

14.Kvantitatívna štúdia močového sedimentu podľa Nechiporenka.

Metóda sa používa pri latentných pomalých zápalových procesoch (pyelonefritída, glomerulonefritída), latentnej pyúrii. Študovať patologický proces v dynamike. Na vyhodnotenie účinnosti liečby. Výhody metódy: technicky jednoduchý, nevyžaduje veľké množstvo moču a je dlhotrvajúci. jeho skladovanie, sa využíva v ambulantnej praxi. Povinné podmienky: ranný moč, stredná časť, kyslý roztok (v alkalickom môže dôjsť k čiastočnému rozpadu bunkových prvkov). 1. Moč sa premieša 2. 10 ml moču sa umiestni do odmernej centrifugačnej skúmavky a centrifuguje sa 10 minút pri 1500 ot./min. 3. Po centrif. sania Pipetujte vrch tekutiny, nechajte. presne 1 ml sedimentu. 4. Zrazenina sa dôkladne premieša a Gorjajevova komora sa naplní. 5. Po 3-5 minútach po naplnení začnú počítať tvarované prvky. 6. Počítanie leukocytov, Er, valcov s okulárom 15 objektívom 8 pri sklopení. kondenzátor, v 100 veľkých komorových štvorcoch. Biele krvinky, Er sa počítajú oddelene, valce (počítajúce najmenej 4 Goryaevove komôrky) sa vylučujú. arit. X \u003d A x 0,25 x 10 6 / l. Norma: jazero. 2-4x 10 6 /l, Er až 1 x 10 6 /l, valce do 0,02 x 10 6 /l (jedna pre 4 komory). U detí: leuk. do 2-4x 10 6 /l, Er do 0,75 x 10 6 /l, valce do 0,02 x 10 6 /l.

15. Analýza moču podľa Zimnitského

Tento test určuje schopnosť obličiek sústrediť sa. a riediť moč. Esencia vzorky pri dynamickom stanovení relatívnej hustoty a množstva moču za tri hodiny po častiach počas dňa. Uskutočnenie testu: po vyprázdnení močového mechúra o 6. hodine ráno na toaletu pacient zbiera moč každé tri hodiny do samostatných nádob počas dňa. Len 8 porcií. Priebeh výskumu: 1. Dodávka. Moč je usporiadaný podľa hodín a v každej porcii určiť množstvo a relatívnu hustotu. 2. Na určenie porovnajte denné množstvo moču a množstvo vypitej tekutiny. % jeho vylučovania. 3. Vypočítajte dennú a nočnú diurézu, zhrňte, získajte dennú diurézu. 4. Nastavte rozsah kolísania množstva a relatívneho. hustota moču za deň t.j. aký je rozdiel medzi najmenšou a najväčšou časťou. Šou. zdravotné testy. osoby: 1. Denná diuréza 800-1500 ml. 2. Denná diuréza výrazne prevažuje nad nočnou. 3. Kolísanie objemu moču v jednotlivých porciách je výrazné (od 50 do 400 ml). 4. Kolísanie p od 1,003 do 1,028 by malo byť väčšie ako 0,008. S funkciou zlyhanie obličiek: hypostenúria, hypoizostenúria, izostenúria, hyperstenúria, oligúria, anúria, noktúria.

16. Opis všeobecných vlastností výkalov.

Normálne sa výkaly skladajú z produktov sekrécie a vylučovania tráviaceho traktu, zvyškov nestrávených alebo čiastočne natrávených potravín a mikrobiálnej flóry. Množstvo výkalov je 100-150 g Konzistencia je hustá. Tvar je valcový. Vôňa je fekálna normálna. Hnedá farba. R-ión je neutrálny, mierne zásaditý alebo mierne kyslý (pH 6,5-7,0-7,5). Hlien chýba. Krv chýba. Chýbajú zvyšky nestrávenej potravy.

Definícia ESR.

Vodný roztok citrátu sodného 5%, objem krvi 1:4. Odoberie sa celá krvná kapilára a zmieša sa s citrátom sodným (25 dielikov). Vložte do Panchekovovho prístroja na 1 hodinu. Manžel Norma. 2-10 mm/h, samica 2-15 mm/h. Zrýchlený ESR-inf. zapálené. procesy, leukémia, malignita. novotvary. Spomalenie ESR-zvýšenie obsahu albumínov, žlčových kyselín.

Fixácia krvných náterov.

Chráni krvinky pred účinkami vody obsiahnutej vo farbách, pod vplyvom ktorých v nefixovaných prípravkoch dochádza k hemolýze erytrocytov a k zmene morfológie leukocytov. Fixačný prostriedok tiež spôsobuje koaguláciu proteínov a pripevňuje náter na sklíčko. Fixatíva: metylalkohol (3-5 min), roztok May-Grunwald eozinmetylénovej modrej, etylalkohol 960 (30 min), chloroform (niekoľko sekúnd), formalín (1 min), Nikiforovova zmes (20 min). Fixácia sa vykonáva v špeciálnych nádobách, ktoré sa spúšťajú do kyvety s fixátorom.

Detekcia bielkovín v moči Gellerov test.

R-you 50% kyselina dusičná, R-larion. Priebeh stanovenia v skúmavke 1-1,5 ml kyseliny dusičnej alebo Larionovho činidla a 1-1,5 ml moču sa naleje pozdĺž steny, v prítomnosti proteínu sa objaví biely krúžok, zmysel vzorky je 0,033 g/l. Vzhľad krúžku po 2-3 minútach

2. Detekcia bielkovín v moči 20% kyselinou sulfosalicylovou.

R-in: roztok 20% ssk: 20 g ssk sa rozpustí v 70 ml destilovanej vody a doplní na 100 ml. priebeh stanovenia: do 2 skúmaviek nalejte 2-3 ml slabo kyslej centrifúgy moču, do 1 skúmavky nalejte 3-4 kvapky roztoku ssk, do 2 skúmaviek nalejte 2 ml dis vody. v prítomnosti proteínu v skúmavke s činidlom sa objaví zákal alebo vločky, kontrolná skúmavka zostáva priehľadná. Minimálne množstvo bielkovín v tejto vzorke je 0,015 g/l.

Malé množstvo bielkovín v dennom moči sa nachádza aj u celkom zdravých jedincov, avšak v súčasnosti používané metódy takéto malé koncentrácie v jednotlivých porciách nezistia. Približne 70 % zdravých bielkovín ľudského moču tvorí uromukoid, bielkovina, ktorá je produktom obličkového tkaniva; teda podiel glomerulárnej bielkoviny v moči zdravých ľudí je zanedbateľný a proteinúria je normálne 50–150 mg/deň, pričom väčšina bielkovín v moči je identická s bielkovinami v sére.

V závislosti od miesta výskytu je obvyklé rozlišovať nasledujúce formy proteinúrie: prerenálna, spojená so zvýšeným rozpadom tkanivových bielkovín, výrazná hemolýza; obličkové, v dôsledku patológie obličiek, ktoré možno rozdeliť na glomerulárne a tubulárne; postrenálne, spojené s patológiou močových ciest a najčastejšie v dôsledku zápalovej exsudácie.

V závislosti od dĺžky existencie je izolovaná trvalá proteinúria, existujúca mnoho týždňov a dokonca rokov, a prechodná, objavujúca sa periodicky, niekedy dokonca aj pri absencii patológie obličiek, napríklad s horúčkou a ťažkou intoxikáciou.
Je vhodné rozlišovať medzi variabilitou proteinúrie: s dennou stratou bielkovín do 1 g - stredná, od 1 do 3 g - stredná a viac ako 3 g - výrazná.

Detekcia proteínov s relatívne veľkou molekulovou hmotnosťou v moči naznačuje absenciu selektivity renálneho filtra a jeho výrazné poškodenie. V týchto prípadoch sa hovorí o nízkej selektivite proteinúrie. Preto sa v súčasnosti rozšírila definícia proteínových frakcií moču. Najpresnejšie metódy elektroforézy v škrobovom a polyakrylamidovom géli. Podľa výsledkov získaných týmito metódami je možné usudzovať na selektivitu proteinúrie.

Väčšina kvalitatívnych a kvantitatívnych metód na stanovenie proteínu v moči je založená na jeho koagulácii v objeme moču alebo na rozhraní médií (moč a kyselina); ak existuje spôsob, ako zmerať intenzitu koagulácie, potom sa vzorka stane kvantitatívnou.

Štandardizovaný test s kyselinou sulfosalicylovou:

Potrebné činidlo:

20% roztok kyseliny sulfosalicylovej.

Priebeh výskumu:

3 ml filtrovaného moču sa nalejú do 2 skúmaviek.
Pridajte 6-8 kvapiek činidla do skúmavky. Na tmavom pozadí porovnajte kontrolnú skúmavku s experimentálnou. Zákal v skúmavke indikuje prítomnosť proteínu, vzorka sa považuje za pozitívnu.

Ak je reakcia moču alkalická, potom sa pred štúdiom okyslí 2-3 kvapkami 10% roztoku kyseliny octovej.

Zjednotená metóda Brandberg-Roberts-Stolnikov:

Metóda je založená na Hellerovom prstencovom teste, ktorý spočíva v tom, že na hranici kyseliny dusičnej a moču v prítomnosti bielkovín dochádza k jej zrážaniu a vzniká biely prstenec.

Potrebné činidlo:

30 % roztok kyseliny dusičnej (relatívna hustota 1,2) alebo Larionovho činidla. Príprava Larionovho činidla: 20-30 g chloridu sodného sa rozpustí zahrievaním v 100 ml destilovanej vody, nechá sa vychladnúť, prefiltruje sa. K 99 ml filtrátu sa pridá 1 ml koncentrovanej kyseliny dusičnej.

Priebeh výskumu:

Do skúmavky sa naleje 1-2 ml kyseliny dusičnej (alebo Larionovho činidla) a rovnaké množstvo prefiltrovaného moču sa opatrne navrství pozdĺž steny skúmavky.
Výskyt tenkého bieleho prstenca na rozhraní medzi dvoma tekutinami medzi 2 a 3 minútami indikuje prítomnosť proteínu v koncentrácii približne 0,033 g/l. Ak sa krúžok objaví skôr ako 2 minúty po vrstvení, moč treba zriediť vodou a opakovať vrstvenie už zriedeného moču. Stupeň riedenia moču sa volí v závislosti od typu krúžku, t.j. jeho šírka, kompaktnosť a čas vzhľadu. S filiformným krúžkom, ktorý sa objavil skôr ako 2 minúty, sa moč zriedi 2-krát, so širokým - 4-krát, s kompaktným - 8-krát atď. Koncentrácia proteínu sa potom vypočíta vynásobením 0,033 stupňom zriedenia a vyjadrí sa v gramoch na 1 liter (g/l).

Niekedy sa v prítomnosti veľkého množstva urátov získa biely krúžok. Na rozdiel od proteínového kruhu sa urátový kruh objavuje mierne nad hranicou medzi dvoma kvapalinami a rozpúšťa sa miernym zahrievaním.

Kvantitatívne stanovenie bielkovín v moči zákalom vytvoreným pridaním kyseliny sulfosalicylovej:

Princíp metódy:

Intenzita zákalu pri koagulácii bielkovín kyselinou sulfosalicylovou je úmerná jej koncentrácii.

Požadované činidlá:

1.
3% roztok kyseliny sulfosalicylovej.

2. 0,9 % roztok chloridu sodného.

3. Štandardný roztok albumínu - 1 % roztok (1 ml roztoku s obsahom 10 mg albumínu): 1 g lyofilizovaného albumínu (z ľudského alebo hovädzieho séra) sa rozpustí v malom množstve 0,9 % roztoku chloridu sodného v banke s objemom 100 ml a potom zrieďte po značku rovnakým roztokom. Činidlo sa stabilizuje pridaním 1 ml 5 % roztoku azidu sodného (NaN3). Pri skladovaní v chladničke vydrží činidlo 2 mesiace.

Špeciálne vybavenie - fotoelektrický kolorimeter.

Priebeh výskumu:

Do skúmavky sa pridá 1,25 ml prefiltrovaného moču, doplní sa do 5 ml 3% roztokom kyseliny sulfosalicylovej, premieša sa. Po 5 minútach sa meria na fotoelektrokolorimetri pri vlnovej dĺžke 590-650 nm (filter oranžového alebo červeného svetla) proti kontrole v kyvete s dĺžkou optickej dráhy 5 mm. Ako kontrola slúži skúmavka, v ktorej bol do 5 ml až 1,25 ml prefiltrovaného moču pridaný 0,9 % roztok chloridu sodného. Výpočet sa vykonáva podľa kalibračného grafu, na zostavenie ktorého sa pripravia riedenia zo štandardného roztoku, ako je uvedené v tabuľke.

Z každého získaného roztoku sa odoberie 1,25 ml a spracuje sa ako experimentálna vzorka.

Priamočiara závislosť v konštrukcii kalibračného grafu je zachovaná do 1 g/l. Pri vyšších koncentráciách by sa mala vzorka zriediť a riedenie by sa malo zohľadniť pri výpočte.

Falošne pozitívne výsledky možno získať v prítomnosti kontrastných látok obsahujúcich organický jód v moči. Preto sa test nemôže použiť u osôb užívajúcich jódové prípravky; falošne pozitívny výsledok môže byť spôsobený aj užívaním sulfátových liekov, veľkých dávok penicilínu a vysokých koncentrácií kyseliny močovej.

Biuretová metóda:

Princíp metódy:

Peptidové väzby proteínu so soľami medi v alkalickom prostredí tvoria fialový komplex. Proteíny sa vopred vyzrážajú kyselinou trichlóroctovou.

Požadované činidlá:

1. 10% roztok kyseliny trichlóroctovej.
2. 20% roztok medi (CuSO4∙5H2O).
3. 3% roztok NaOH.

Priebeh výskumu:

Do 5 ml moču odobratého z denného množstva pridáme 3 ml roztoku kyseliny trichlóroctovej, odstredíme do konštantného objemu sedimentu. Supernatant sa odsaje pipetou, zrazenina sa potom rozpustí v 5 ml roztoku NaOH. K roztoku sa pridá 0,25 ml CuSO4, zmes sa mieša a odstredí. Supernatant sa fotometruje pri vlnovej dĺžke 540 nm v kyvete s dĺžkou optickej dráhy 10 mm proti destilovanej vode. Koncentrácia proteínu sa vypočíta z kalibračnej krivky, pri konštrukcii ktorej je na zvislú os vynesená koncentrácia proteínu (g/l) a na vodorovnú os optická hustota v extinkčných jednotkách. Podľa získanej koncentrácie sa vypočíta denná strata bielkovín v moči.

Použitie indikátorového papiera (prúžkov):

Proteín je možné detegovať pomocou indikátorového papierika (prúžkov), ktoré vyrábajú Albuphan, Ames (Anglicko), Albustix, Boehringer (Nemecko), Comburtest atď.

Princíp je založený na fenoméne takzvanej proteínovej chyby niektorých acidobázických indikátorov. Indikátorová časť papiera je impregnovaná tetrabrómfenolovou modrou a citrátovým pufrom. Keď je papier vlhký, pufer sa rozpustí a poskytne vhodné pH pre reakciu indikátora.

Pri 3,0-3,5 aminoskupiny proteínov reagujú s indikátorom a menia svoju pôvodne žltú farbu na zeleno-modrú, po čom je možné v porovnaní s farebnou stupnicou približne odhadnúť koncentráciu proteínu v skúmanom moči. Hlavným predpokladom správneho fungovania testovacích prúžkov je poskytnúť pH v rozsahu 3,0-3,5, aby reakcia mohla prebiehať.

Ak je papierik v kontakte s testovaným močom dlhšie, ako je expozícia uvedená v návode, potom sa v ňom rozpustí citrátový pufor a následne indikátor reaguje na skutočné pH moču, t.j. dáva falošne pozitívnu reakciu. Vzhľadom na skutočnosť, že kapacita tlmivého roztoku je obmedzená, aj keď sú dodržané pokyny, získavajú sa falošne pozitívne výsledky vo vzorkách príliš alkalického moču (pH > 6,5) a vo vzorkách príliš kyslého moču (pH
Počet reagujúcich aminoskupín v zložení jednotlivých proteínov je rôzny, preto albumíny reagujú 2-krát intenzívnejšie ako rovnaké množstvo γ-globulínov (Bence-Jonesov proteín, paraproteíny) a oveľa intenzívnejšie ako glykoproteíny. Pri veľkom množstve hlienu s vysokým obsahom glykoproteínov (pri zápale močových ciest) však môžu vločky hlienu usadené na indikačnom prúžku poskytnúť falošne pozitívne výsledky.

Citlivosť jednotlivých výrobných šarží indikátorového papiera, ako aj jednotlivých druhov papiera vyrábaných tou istou spoločnosťou môže byť rôzna, preto je potrebné ku kvantifikácii bielkovín touto metódou pristupovať opatrne. Stanovenie dennej straty bielkovín v moči pomocou indikátorového papierika nie je možné. Indikátorový papierik je teda horší ako chemické vzorky, predovšetkým vzorka s kyselinou sulfosalicylovou, hoci umožňuje rýchlo študovať sériu vzoriek.

Detekcia Bence-Jonesovho proteínu v moči:

Bence-Jonesov proteín sa môže vylučovať močom s mnohopočetným myelómom, Waldenströmovou makroglobulinémiou.

Štúdia sa odporúča vykonať iba s pozitívnym testom s kyselinou sulfosalicylovou. Indikačný papierik na dôkaz Bence-Jonesovho proteínu je nevhodný.

Princíp:

Na základe termoprecipitačnej reakcie. Metódy, ktoré hodnotia rozpustenie proteínu Bence-Jones pri teplote 100 °C alebo opätovné vyzrážanie po následnom ochladení, sú nespoľahlivé, pretože nie všetky proteínové telieska Bence-Jones majú vhodné vlastnosti. Najspoľahlivejšia detekcia tohto paraproteínu je vyzrážaním pri teplote 40-60 °C, ale ani za týchto podmienok nemusí dôjsť k zrážaniu v príliš kyslom (pH 6,5) moči, pri nízkej relatívnej hustote moču a nízkej koncentrácia proteínu Bence-Jones.

Požadované činidlá:

2 M acetátový pufor pH 4,9.

Priebeh výskumu:

Prefiltrovaný moč v množstve 4 ml sa zmieša s 1 ml pufra a zahrieva sa 15 minút vo vodnom kúpeli pri teplote 56 °C. V prítomnosti proteínov Bens-Jones sa do 2 minút objaví výrazná zrazenina; ak je koncentrácia proteínu Bens-Jones nižšia ako 3 g / l, vzorka môže byť negatívna. V praxi je to extrémne zriedkavé, pretože z väčšej časti je koncentrácia Bens-Jones proteínu v moči významná.

S úplnou istotou možno Bence-Jonesov proteín detegovať imunoelektroforetickou štúdiou s použitím špecifických sér proti ťažkým a ľahkým reťazcom imunoglobulínov.

Definícia albumózy (proteózy):

Albumózy sú produkty rozkladu bielkovín, ktorých princíp je založený na tom, že sa pri varení neskladajú, ale dávajú pozitívnu biuretovú reakciu a v kyslom prostredí sú vysolené niektorými soľami, najmä síranom amónnym a octanom zinočnatým.

Normálny moč neobsahuje albumín. Stopy môžu byť v normálnom moči v prípade prímesí semennej tekutiny. V patológii sa albumózy môžu vyskytovať v moči pri horúčkovitých stavoch, pri transfúziách krvi a plazmy, pri resorpcii exsudátov a transudátov a pri rozpade nádorov.

Požadované činidlá:

1. Nasýtený roztok chloridu sodného.
2. Koncentrovaný roztok hydroxidu sodného.
3. Slabý roztok síranu meďnatého (takmer bezfarebný).

Priebeh výskumu:

Do moču okysleného kyselinou octovou sa pridá nasýtený roztok chloridu sodného (1/3 objemu), prevarí sa a horúca tekutina sa prefiltruje. Albumózy prechádzajú do filtrátu, v ktorom je ich prítomnosť určená biuretovou reakciou. K filtrátu sa pridá 1/2 objemu koncentrovaného roztoku hydroxidu sodného a niekoľko kvapiek slabého roztoku síranu meďnatého. Výsledkom pozitívneho testu je červenofialová farba.

Pri pozitívnom teste s kyselinou sulfosalicylovou sa moč zahrieva. Ak zákal zmizne a po ochladení sa znova objaví, znamená to, že moč obsahuje albumózy alebo proteínové telo Bence-Jonesa.

Test má citlivosť 0,033 g/l a používa sa pri klinickej diagnostike proteinúrie. Princíp detekcie proteínu je založený na jeho denaturácii pod vplyvom denaturačného faktora - koncentrovanej kyseliny dusičnej alebo Larionovho činidla.

Je potrebné poznamenať, že určité množstvo bielkovín je vždy prítomné v moči, ale spravidla je jeho koncentrácia v moči zdravého človeka pod prahom citlivosti kvalitatívnej reakcie a nie je detegovaná jednoduchými metódami. Pre množstvá bielkovín nad 0,033 g/l nie je vzorka vhodná. Pri vyšších koncentráciách zrieďte moč alebo použite Esbachov albuminometer.

Na stanovenie množstva celkových bielkovín v moči sa používa metóda založená na Gellerovom teste – metóda Brandberg-Roberts-Stolnikov (W. Roberts, 1830-1899, anglický terapeut). Technika zahŕňa riedenie moču na spodnú hranicu citlivosti vzorky (0,033 g/l) a dobu tvorby krúžku 2-3 minúty.

Priebeh analýzy

Činidlá: koncentrovaná (dymiaca) kyselina dusičná alebo Larionova činidlo. Testovaný moč by mal byť čistý a kyslý.

Príprava Larionovho činidla

Pripravíme si nasýtený roztok chloridu sodného (20-30 g soli rozpustíme v 100 ml teplej vody, necháme odstáť do vychladnutia). Supernatant sa vyhodí a prefiltruje. K 99 ml filtrátu pridajte 1 ml koncentrovanej kyseliny dusičnej (môžete nahradiť 2 ml kyseliny chlorovodíkovej).

Technika výskumu

Približne rovnaké množstvo moču sa opatrne navrství pozdĺž steny do skúmavky s 1-2 ml činidla. V prítomnosti bielkoviny sa asi po 2-3 minútach na rozhraní medzi kvapalinami pozoruje zákal – biely prstenec denaturovanej bielkoviny.

Pri použití kyseliny dusičnej sa môže vyskytnúť falošne pozitívny výsledok v dôsledku vysokej koncentrácie nukleoalbumínu alebo urátových solí. V prvom prípade zmizne, keď sa trubica mierne zatrasie, a v druhom prípade je krúžok umiestnený oveľa vyššie ako rozhranie medzi médiami a pri zahriatí zmizne; pri opakovaní testu so zriedeným močom sa krúžok nevytvorí. Niekedy sa tiež objaví hnedastý pigmentovaný kruh z oxidácie urochrómu kyselinou dusičnou.

Použitie činidla Larionic, na rozdiel od kyseliny dusičnej, má množstvo výhod: pigmentové krúžky sa nevytvárajú na hranici vrstvenia a pozitívny výsledok poskytuje jasnejšie proteínové krúžky.

pozri tiež

Napíšte recenziu na článok "Gellerov test"

Odkazy

Literatúra

K:Wikipedia:Články bez obrázkov (typ: nešpecifikovaný)

Výňatok charakterizujúci Gellerov test

Gróf opäť zašiel za prepážku a ľahol si. Grófka podišla k Natashe, dotkla sa jej hlavy vyvrátenou rukou, ako to robila, keď bola jej dcéra chorá, potom sa jej dotkla perami čela, akoby chcela zistiť, či nemá horúčku, a pobozkala ju.
- Si chladný. Celá sa trasiete. Mal by si ísť spať," povedala.
- Ľahnúť si? Áno, dobre, pôjdem spať. Teraz idem do postele, - povedala Natasha.
Keďže Natashe dnes ráno povedali, že princ Andrei je vážne zranený a cestuje s nimi, len v prvej minúte sa veľa pýtala, kde? ako? je nebezpečne zranený? a vidí ho? Ale potom, čo jej povedali, že ho nesmie vidieť, že je vážne zranený, ale že nie je v ohrození života, zjavne neverila tomu, čo jej povedali, ale bola presvedčená, že bez ohľadu na to, koľko povedala, by odpovedal to isté, prestal by sa pýtať a rozprávať. Celú cestu s veľkými očami, ktoré grófka tak dobre poznala a ktorých výrazu sa grófka tak bála, sedela Nataša nehybne v rohu koča a teraz sedela rovnakým spôsobom na lavici, na ktorú si sadla. Premýšľala o niečom, o niečom, o čom sa rozhodovala alebo už rozhodla v duchu teraz - grófka to vedela, ale nevedela, čo to bolo, a to ju vystrašilo a trápilo.
- Natasha, vyzleč sa, moja drahá, ľahni si na moju posteľ. (Len grófka bola ustlaná na posteli; ja Schoss a obe mladé dámy museli spať na podlahe v sene.)
"Nie, mami, ľahnem si sem na podlahu," povedala Natasha nahnevane, podišla k oknu a otvorila ho. Z otvoreného okna bolo zreteľnejšie počuť ston pobočníka. Vystrčila hlavu do vlhkého nočného vzduchu a grófka videla, ako sa jej tenké plecia chveli vzlykmi a bili o rám. Natasha vedela, že to nebol princ Andrej, kto nariekal. Vedela, že princ Andrei leží v rovnakom spojení ako oni, v inej chatrči na druhej strane priechodu; ale tento strašný neutíchajúci ston ju prinútil vzlykať. Grófka si vymenila pohľady so Sonyou.
„Ľahni si, drahá, ľahni si, priateľka,“ povedala grófka a zľahka sa rukou dotkla Natašinho ramena. - Tak choď do postele.
"Ach, áno... teraz si ľahnem," povedala Natasha, rýchlo sa vyzliekla a strhla si šnúrky sukní. Zhodila si šaty a obliekla sako, vystrčila nohy, sadla si na posteľ pripravenú na dlážke, prehodila si cez plece krátky tenký vrkoč a začala ho pliesť. Tenké dlhé zvyčajné prsty rýchlo, obratne rozoberali, tkali, viazali vrkoč. Natašina hlava sa zvyčajným gestom otočila najskôr na jednu stranu, potom na druhú, no jej oči, horúčkovito otvorené, uprene hľadeli priamo pred seba. Keď sa nočný kostým skončil, Natasha ticho klesla na plachtu rozprestretú na sene z okraja dverí.
"Natasha, ľahni si do stredu," povedala Sonya.
"Nie, som tu," povedala Natasha. „Choď do postele,“ dodala naštvane. A zaborila si tvár do vankúša.

Hellerov prstencový test pomáha analyzovať bielkovinovú zložku moču. Táto metóda, ktorú vyvinul Joseph Geller, je založená na fyzikálno-chemickom procese adhézie. Moč vyžaduje určitú podmienku: pri vyšetrení potrebujú jasnú vzorku ktorý je kyslý.

Pre štúdiu sa používa koncentrát kyseliny dusičnej HNO3. Pre túto metódu je vhodné aj činidlo Larionovej. Na jeho výrobu sa pripraví roztok chloridu sodného v koncentrovanom stave: dvadsaťpäť miligramov soli sa pridá do sto mililitrov vody.

Potom sa kvapalina zahrieva, keď k tomu dôjde úplné rozpustenie soli. Po ochladení roztoku sa supernatant odstráni a 99 mililitrov sa spojí s jedným mililitrom koncentrátu HN03. Môže sa nahradiť aj dvoma mililitrami koncentrátu kyseliny chlorovodíkovej.

Vykonávanie algoritmu

Na Gellerov test budete potrebovať skúmavku, v ktorej je činidlo umiestnené v objeme jeden až dva mililitre. Potom sa veľmi opatrne pridá testovaný moč pozdĺž steny nádoby v rovnakých pomeroch ako činidlo. Po uplynutí tri minúty Pri interakciách sa prítomnosť proteínu prejaví ako zakalená hraničná čiara medzi močom a činidlom. Tento kruh je proteín denaturovaný alkohol.

Falošne pozitívny účinok štúdie sa môže vyskytnúť v prípade použitia kyseliny dusičnej, ako aj pri veľkom množstve nukleoalbumínu alebo urátových solí. V prvej situácii sa krúžok rozpustí, ak sa skúmavka mierne zatrasie. Druhá situácia predpokladá prítomnosť krúžku, ktorý bude lokalizovaný mierne nad deliacou čiarou. Rozpúšťa sa, keď teplota kvapaliny stúpa. V niektorých prípadoch sa objaví hnedý kruh, ktorý je výsledkom oxidácie urochrómu dusíkovou zložkou.

Pri porovnaní účinku použitia HNO3 a Larionovho činidla by som rád označil druhú možnosť za presnejšiu. Má množstvo výhod:

• Larionovej činidlo pri analýze nevytvára pigmentové krúžky.
• Proteínové krúžky sú zobrazené jasnejšie ako pri použití Hellerovej metódy.
• Kyselina dusičná je zachovaná.
• Činidlo nie je také nebezpečné a keďže je na látke, neprepáli sa cez ňu.

Nevýhody pri použití vzorky

1. Použitie Gellerovho testu je pomerne komplikovaný proces, ktorý vyžaduje pomerne veľa času, rovnako ako koncentrát kyseliny dusičnej.
2. Môže sa objaviť hnedý pigmentový krúžok, ktorý bráni detekcii proteínu.
3. V materiáli obsahujúcom soľ kyseliny močovej sa môže vytvoriť biely krúžok umiestnený vysoko nad čiarou, ktorá oddeľuje tekutiny.
4. Štúdia môže tiež poskytnúť falošne pozitívne výsledky v prípade veľkého množstva kyseliny močovej.

Alternatívne

Rýchlejší a jednoduchší spôsob určenia bielkoviny v moči je pomocou špeciálneho papierika, ktorý je indikátorom.

V tejto verzii štúdie je do materiálu ponorený papierový pásik, ktorý obsahuje špeciálnu impregnáciu, vďaka ktorej indikátorový papierik pri kontakte s močom získava farbu v rozmedzí od žltej po modrú. Odtieň označuje koncentráciu proteínu. Existuje škála, na základe ktorej možno urobiť tento záver.

Aby bol výsledok čo najpresnejší, mali by ste dodržiavať niektoré pravidlá:

• pH materiálu musí byť pri 3,0 až 3,5. Veľké množstvo alkálií dáva falošne pozitívny výsledok a v prípade veľkého množstva kyseliny v moči falošne negatívny.
• Papierový indikátor by nemal byť v kontakte s materiálom dlhšie ako je určený čas. V opačnom prípade bude výsledok skreslený.
• Tiež, ak je hlienu príliš veľa, môže dôjsť k falošne pozitívnemu výsledku.
• V závislosti od papiera a jeho výrobcu sa môže citlivosť indikátora líšiť. Nespoliehajte sa teda na tento test na obsah bielkovín v moči.
• Denný moč nemôže ukázať množstvo bielkovín.